Pages 71-76
Sawitri Silakes, Amrit N. Bart

由于硬骨鱼类胚胎的深低温保存需要冷冻剂高强度渗透到胚胎细胞中，因此只有玻璃化才有可能使之获得成功。本研究确定了超声波对甲醇（MeOH）在三类（去绒毛膜胚胎，软绒毛膜胚胎和完整的胚胎）斑马鱼胚胎中以及三个不同阶段（90%外包阶段，胚芽阶段和4体节阶段）的斑马鱼胚胎中的渗透性的影响。三种胚胎被首先放置在不同浓度水平的甲醇中，优化其存活率。然后去绒毛膜胚胎被放置在有或没有超声波处理的20%的甲醇溶液中3分钟，软绒毛胚胎则放置在30%的甲醇溶液中3分钟，完整的胚胎放置在40%甲醇溶液中3分钟。采用高效液相色谱法测量处理过的胚胎中的甲醇含量。从渗透有甲醇的斑马鱼胚胎中回收的全部甲醇为100.62 ± 3.99%。全面渗透到斑马鱼胚胎中的甲醇含量范围在85.3 ± 8.1 μmol（有超声波处理的处于90%外包阶段的软绒毛膜胚胎）到3.1 ± 1.0 μmol（无超声波处理的处于90%外包阶段的去绒毛膜胚胎）之间。超声波明显有助于提高甲醇进入斑马鱼胚胎的渗透水平（p < 0.05）。在软绒毛膜胚胎中发现甲醇含量高。在有和没有超声波处理的胚胎之间，去绒毛膜胚胎中的甲醇含量的相对差异最大。虽然超声波显著影响胚胎存活率，存活率通常较高（64 ± 2% 到100%）。然而，甚至在最佳处理中的最高甲醇含量（85.3 ± 8.1 μmol）也远低于玻璃化所需要的含量。需要应用新颖的非损伤性的方法作进一步的研究，为胚胎成功的玻璃化而实现更大的甲醇渗透。

《Aquaculture》Volume 303, Issues 1-4